Moderní medicína má specifické diagnostické metody, které umožňují stanovit etiologii onemocnění u člověka na základě definice patogenu, geneticky cizích látek stimulujících imunitní odpověď, nukleových kyselin, ale i alergických a imunitních změn k nimž dochází v důsledku jeho jednání. Dnes je RIA široce používána v imunologii a virologii, to znamená radioimunoanalýza, cíle nastavení, komponenty, průběh, jehož účtování, budeme zvažovat v tomto článku. Tento test je schopen detekovat antigeny jako výsledek jejich interakce s protilátkami.
Definice
RIA je metoda diagnostiky biologicky aktivních látek v kapalinách, která je založena na reakci antigenů s protilátkami při použití radionuklidem značených analogických látek, které mají speciální vazebné systémy. Po jejich interakcivzniká imunitní komplex, který se oddělí a studuje se jeho radioaktivita. Je známo, že radioimunoanalýza se provádí pomocí standardních reagenčních souprav.
Každé činidlo je schopno určit koncentraci jedné konkrétní látky. Biologická tekutina odebraná člověku se smíchá s činidlem, po inkubační době se oddělí volné a vázané radioaktivní látky, poté se provede radiometrie a vypočtou se výsledky. K označování látek se používá izotop jódu. Je označeno a přidáno v určitém množství.
Aplikace
Radioimunitní analýza má široké uplatnění v medicíně a mikrobiologii. Používá se k diagnostice onemocnění srdce a cév, onemocnění endokrinních a jiných tělesných systémů. RIA se také často používají k identifikaci příčiny neplodnosti, patologie vývoje plodu. V onkologii se tato analýza provádí za účelem stanovení markerů novotvarů, aby bylo možné sledovat účinnost léčby. V imunologii se RIA používá ke studiu přítomnosti imunoglobulinů, enzymů, proteinů a tak dále v krvi. Dnes tato analýza umožňuje detekovat koncentraci různých hormonů až do miliontiny jednoho gramu. Radioimunitní analýza krve je tedy široce používána v kardiologii, onkologii, endokrinologii, gynekologii a virologii.
Metody RIA
Je obvyklé rozlišovat mezi několika metodami analýzy v závislosti na povazereakce:
- Nekompetitivní metoda je charakterizována takovými reakčními složkami, jako jsou standardní a detekovatelné antigeny, roztok pufru, izotopově značené protilátky, určité protilátky, které se vážou na sorbent. K testovaným protilátkám se přidá antigen. Po inkubaci se objeví komplexy antigen-protilátka, sorbent se promyje, přidají se značené protilátky, které se vážou na antigen v komplexu. Radioaktivita závisí na koncentraci testovaného antigenu.
- Konkurenční radioimunoanalýza je řízena konkurencí antigenu. Zde jsou takové složky reakce jako kontrolní a stanovené antigeny, roztok pufru, určité protilátky, které se vážou na sorbent, stejně jako izotopově značený antigen. Diagnostika začíná zavedením antigenu, který je vyšetřován. Na sorbentu se tvoří komplex antigen-protilátka. Poté se sorbent promyje a injikuje se značený antigen. Přitom se váže na protilátku. Pomocí čítačů se měří reakce a množství radioaktivity. Bude nepřímo úměrné množství antigenu ve vzorku.
- Nepřímá metoda je nejběžnější. V tomto případě má radioimunoanalýza reakční složky např. kontrolní a testovací sérum, antigeny nebo protilátky, které jsou navázány na sorbent, protilátky značené izotopy, roztoky pufrů. Protilátky nebo antigeny, které jsou diagnostikovány, reagují s antigeny nebo protilátkami, které jsou navázány na sorbent. Poté se inkubát odstraní, vstříknou se značené protilátky, které se navážou nakomplexy antigen-protilátka.
Metodika analýzy
Radioimunoanalýza se tedy provádí pomocí speciálních činidel. Sady jsou standardní, takže jakékoli chyby nebo porušení nejsou povoleny. Výsledky diagnostiky jsou spolehlivé. Analýza se provádí ráno, proto odebírají žilní krev člověku. V laboratoři se z krve oddělí sérum, které bude použito pro RIA. Toto sérum se smíchá s činidly. Výsledná směs se inkubuje při dané teplotě v termostatu.
Ve výsledné směsi se oddělí volné a vázané izotopy. Poté je přijatý materiál zkoumán a jsou vypočteny výsledky. Mechanismus radioimunologického testu má několik možností. Výše popsaná technika je RIA v kapalné fázi, protože všechny složky jsou v kapalném stavu. Existuje RIA a pevná fáze, kde jsou protilátky umístěny v nosiči, který se nerozpouští v kapalině.
Dostupnost diagnostiky
Použití této diagnostické metody v medicíně je rok od roku populárnější. Radioimunoanalýza se v poslední době stala standardní diagnostickou metodou, kterou může předepsat lékař při stanovení konečné diagnózy. Tento typ analýzy byl dlouhou dobu prováděn pouze v laboratořích, dnes se stal běžnou výzkumnou metodou. Ale RIA vyžaduje použití drahého vybavení (gama čítače) a reagenční soupravy mají krátkou životnost. To vše je hlavní nevýhodou takové analýzy, která ji určujedrahé náklady.
Kromě toho RIA nedávno začala nahrazovat modernější výzkumné metody, které nevyžadují interakci s izotopy. Patří mezi ně enzymatická imunoanalýza. RIA je tedy žádoucí na mnoha klinikách. Dlouho se používá ve velkých městech a diagnostických centrech, ale v běžných nemocnicích v malých městech se tato analýza prakticky nepoužívá kvůli její vysoké ceně.
Důstojnost RIA
Radioimunoanalýza má mnoho výhod. Je zcela specifický a má vysokou citlivost, což umožňuje stanovit přítomnost biologicky aktivních látek v neuvěřitelně malých množstvích. Tato analýza se provádí velmi jednoduše, člověk je povinen darovat pouze žilní krev. Výsledky testu jsou 100% přesné a připravené hned druhý den. RIA lze také snadno automatizovat. Tato analýza vám tedy umožňuje identifikovat proteiny, které jsou odpadními produkty infekčních bakterií, což ukazuje na přítomnost infekce v těle.
Diagnostika ve virologii
Nejslibnější RIA je pro virologii, protože umožňuje rychle identifikovat virové patogeny. Je to dáno tím, že v posledních letech roste výskyt různých infekcí, které se šíří vysokou rychlostí a způsobují úmrtnost lidí. To platí zejména pro země, které nemají vysokousociální a ekonomický rozvoj (země Dálného východu), radioimunoanalýza je zde prostě nepostradatelná. Mikrobiologie také využívá tuto diagnostickou metodu k detekci infekčních onemocnění způsobených patogenními bakteriemi. Například RIA se široce používá k detekci břišního tyfu. V prvních dnech onemocnění, před jmenováním léčby, je nutné provést studii výkalů a zvracení. Výsledky diagnostiky se však dostaví až po dlouhé době. Zde RIA přichází na záchranu, analýza vám umožňuje v krátké době identifikovat původce onemocnění. Člověk daruje krev, druhý den jsou výsledky studie hotové. Tato analýza pomáhá při stanovení přesné diagnózy.
Výsledky
Radioimunoanalýza je v současnosti jednou z nejcitlivějších diagnostických metod. Používá se k analýze jakékoli látky, proti které lze získat protilátky. Tato metoda umožňuje vyrobit mnoho vzorků v nejmenším objemu zkoumané kapaliny a také zaznamenat výsledky v co nejkratším čase, protože ji lze plně automatizovat. Tato analýza byla vyvinuta v 50. letech 20. století Solomonem Bursonem. O třicet let později se rozšířila. K dnešnímu dni neexistuje stoprocentní alternativa k RIA, protože analýza má vysokou citlivost. RIA se používá v různých odvětvích medicíny, stejně jako v mikrobiologii a virologii.
Konečně
Použití této metody ve virologii je dnes velmi aktuální, jak dáváschopnost vyšetřit šíření infekcí, stanovit přesnou diagnózu a předepsat specifickou léčbu. Tento problém je zvláště aktuální pro země s nízkou úrovní ekonomiky a sociálního rozvoje. Tato analýza také umožňuje detekovat množství hormonů a enzymů v lidském těle. Aby výzkumník získal spolehlivé výsledky, potřebuje pouze darovat krev k analýze. Medicína nestojí na místě, spolu s radioimunoanalýzou se objevují nové výzkumné metody, ale RIA je i nadále jedním z lídrů v lékařské diagnostice.
