Jakákoli částice, ať už je to molekula, atom nebo iont, přechází v důsledku absorpce kvanta světla do vyšší úrovně energetického stavu. Nejčastěji dochází k přechodu ze základního stavu do excitovaného stavu. To způsobí, že se ve spektrech objeví určité absorpční pásy.
Absorpce záření vede k tomu, že při průchodu látkou se intenzita tohoto záření snižuje s nárůstem počtu částic látky s určitou optickou hustotou. Tuto metodu výzkumu navrhl V. M. Severgin již v roce 1795.
Tato metoda je nejvhodnější pro reakce, kdy je analyt schopen přeměnit se na barevnou sloučeninu, která způsobí změnu barvy testovaného roztoku. Změřením absorpce světla nebo porovnáním barvy s roztokem o známé koncentraci je snadné najít procento látky v roztoku.
Základní zákon absorpce světla
Podstatou fotometrického stanovení jsou dva procesy:
- přenos analytu doabsorpční směs;
- měření intenzity absorpce stejných vibrací roztokem zkoušené látky.
Změny intenzity světla procházejícího materiálem pohlcujícím světlo budou také způsobeny ztrátou světla v důsledku odrazu a rozptylu. Aby byl výsledek spolehlivý, provádějí se paralelní studie k měření parametrů při stejné tloušťce vrstvy, v identických kyvetách, se stejným rozpouštědlem. Pokles intenzity světla tedy závisí hlavně na koncentraci roztoku.
Pokles intenzity světla procházejícího roztokem je charakterizován koeficientem prostupu světla (nazývaným také jeho prostup) T:
Т=I / I0, kde:
- I - intenzita světla procházející látkou;
- I0 - intenzita dopadajícího světelného paprsku.
Propustnost tedy ukazuje podíl neabsorbovaného světelného toku procházejícího studovaným roztokem. Algoritmus inverzní hodnoty přenosu se nazývá optická hustota roztoku (D): D=(-lgT)=(-lg)(I / I0)=lg(I 0 / I).
Tato rovnice ukazuje, které parametry jsou pro výzkum hlavní. Patří mezi ně vlnová délka světla, tloušťka kyvety, koncentrace roztoku a optická hustota.
Bouguer-Lambert-Beerův zákon
Je to matematický výraz, který zobrazuje závislost poklesu intenzity monochromatického světelného toku od koncentraceabsorbent a tloušťka vrstvy kapaliny, kterou prochází:
I=I010-ε·С·ι, kde:
- ε - koeficient absorpce světla;
- С - koncentrace látky, mol/l;
- ι - tloušťka vrstvy analyzovaného roztoku, viz
Po transformaci lze tento vzorec napsat: I / I0 =10-ε·С·ι.
Podstata zákona je následující: různé roztoky stejné sloučeniny při stejné koncentraci a tloušťce vrstvy v kyvetě absorbují stejnou část světla, které na ně dopadá.
Logaritmováním poslední rovnice můžete získat vzorec: D=εCι.
Je zřejmé, že optická hustota přímo závisí na koncentraci roztoku a tloušťce jeho vrstvy. Fyzikální význam molárního absorpčního koeficientu je jasný. Rovná se D pro jednomolární roztok a s tloušťkou vrstvy 1 cm.
Omezení aplikace zákona
Tato sekce obsahuje následující položky:
- Platí pouze pro monochromatické světlo.
- Koeficient ε souvisí s indexem lomu média, zvláště silné odchylky od zákona lze pozorovat při analýze vysoce koncentrovaných roztoků.
- Teplota při měření optické hustoty musí být konstantní (v rozmezí několika stupňů).
- Světelný paprsek musí být rovnoběžný.
- Ph média musí být konstantní.
- Zákon se vztahuje na látkyjejichž centra pohlcující světlo jsou částice stejného typu.
Metody pro stanovení koncentrace
Vyplatí se zvážit metodu kalibrační křivky. K jeho sestavení připravte řadu roztoků (5–10) s různými koncentracemi zkoušené látky a změřte jejich optickou hustotu. Podle získaných hodnot se vynese graf D versus koncentrace. Graf je přímka od počátku. Umožňuje vám snadno určit koncentraci látky z výsledků měření.
Existuje také způsob přidávání. Používá se méně často než předchozí, ale umožňuje analyzovat řešení složitého složení, protože bere v úvahu vliv dalších složek. Jeho podstatou je stanovení optické hustoty média Dx, obsahujícího analyt neznámé koncentrace Сx, s opakovanou analýzou stejného roztoku, ale s přidání určitého množství testovací složky (Сst). Hodnota Cx se zjistí pomocí výpočtů nebo grafů.
Podmínky výzkumu
Aby fotometrické studie poskytly spolehlivý výsledek, musí být splněno několik podmínek:
- reakce musí skončit rychle a úplně, selektivně a reprodukovatelně;
- barva výsledné látky musí být stálá v průběhu času a nesmí se měnit působením světla;
- testovaná látka se bere v množství dostatečném k jejímu převedení do analytické formy;
- měřeníoptická hustota se provádí v rozsahu vlnových délek, při kterém je rozdíl v absorpci počátečních činidel a analyzovaného roztoku největší;
- absorpce světla referenčního roztoku se považuje za optickou nulu.