Tento článek bude věnován fenoménu srážecí reakce. Zde budeme zvažovat rysy formulace tohoto jevu, fenomén difúze, obecné charakteristiky, roli v lidském životě a mnoho dalšího.
Úvod do fenoménu
Precipitace je jev sérologického typu, při kterém rozpustné antigeny interagují s protilátkami a v důsledku toho je pozorována precipitace - sraženina.
Obecnou charakteristikou precipitační reakce je forma koordinovaný vliv antigenu a protilátky. Tyto typy interakcí umožňují stanovit přítomnost neznámých antigenů v testované látce přidáním známých protilátek a antigenů. Proces srážení bez přítomnosti solí bude probíhat hůře a nejlepší optimum leží v rozmezí 7,0-7,4 pH.
Složky reakce
Mezi složkami srážecí reakce jsou tři hlavní prvky:
- Antigen molekulární povahy. Je ve stavu jemného typu, jinými slovy, jerozpustný. Také se takový antigen nazývá precipitogen, což je lyzát nebo tkáňový extrakt atd. Precipitogen má charakteristický rozdíl od aglutinogenu, který spočívá ve velikosti částic, ze kterých se skládá. Aglutinogen má vlastní velikost buněk a precipitogeny jsou úměrné velikosti molekuly. Roztok antigenu se vyznačuje průhledností.
- Protilátka nalezená v lidském krevním séru a také v imunitním diagnostickém séru, které obsahuje studované protilátky.
- Elektrolyty jsou roztoky chloridu sodného, které jsou izotonické.
Produkce precipitogenů
Nastavení srážecí reakce je nemožné bez precipitogenu, který se získává rozemletím materiálů a extrakcí proteinových antigenů z nich. K extrakci dochází varem nebo jinými metodami.
Nápadné jsou lyzáty, dále tkáňové a orgánové extrakty, krevní séra, různé typy filtrátů na bázi mikrobiálních bujónových kultur, ale i solný extrakt mikroorganismů a autolyzátové látky příklad precipitogenů.
Nastavení za srážek
Nyní se podíváme na způsob nastavení srážecí reakce.
Provádí se prstencová srážecí reakce, která probíhá ve speciálně připravených zkumavkách. Sérum se zavádí do dutiny nádobí a nalévá se přes stěnu pomocí pipety. Dále se na vrch opatrně navrství příslušné množství srážedla a poté se zkumavka uvede z vodorovné do svislé polohy. Nastavení a zohlednění srážecí reakce je velmi pečlivá operace. Výsledek se zaznamená po objevení se bílého kroužku na hranici mezi antigenem a protilátkou. Pokud si reagující prvky reakce navzájem odpovídají, pak se vážou, ale to se projeví až po dlouhé době jejich interakce
Srážecí reakce se také provádí v Petriho misce nebo na skle sklíčko, kam se přenese agarový gel a nanese se v malé vrstvě. Po vytvrzení v gelu se vyřízne malý počet jamek, do kterých se umístí antigeny a protilátky. Tuto akci lze provést dvěma způsoby: metodou radiální imunodifuze a dvojité imunodifuze.
Obecné informace
Mechanika práce srážení je podobná aglutinačnímu zařízení. Pod vlivem séra imunitního typu snižuje antigen, který již vstoupil do reakce, stupeň své disperze. Důležitou podmínkou je průhlednost séra i antigenu.
Zaregistrování reakce můžete zlepšit, pokud na protilátky nanesete antigeny. V důsledku toho lze pozorovat výskyt sraženin ve formě prstence. Tento jev se nazývá srážení prstenců a probíhá ve speciálních trubkách o průměru 2,5 až 3,5 mm. Jedním z nejběžnějších příkladů precipitační reakce je diagnóza antraxu.
Precipitace umožňuje stanovit úroveň toxigenity difterické kultury v agaru.
Během uvažované reakcedochází k vysrážení antigenních komplexů a protilátek. Precipitace je imunologický jev, který umožňuje určit množství protilátek v krevním séru nemocné nebo očkované osoby a zvířat.
Následek titrace
Je důležité vědět, že údaje získané titrací výše uvedené metody nejsou kvantifikovatelné. Pro vytvoření a analýzu kvantitativního hodnocení obsaženého počtu protilátek byla M. Heidelbergerem a E. Kabatem vyvinuta speciální reakční technika, která je založena na hledání a identifikaci zóny ekvivalence. Smíchání věkového počtu antigenů s konstantním objemem antiséra vede ke zvýšení původně vytvořené sraženiny a následně opět k jejímu poklesu v důsledku zvýšení schopnosti rozpouštět komplexy antigenů. Stanovením množství protilátek v supernatantech obsažených v každé zkumavce můžete zjistit, že v určitém počtu misek s protilátkami bude chybět tekutina. Zde se ve srovnání s ostatními zkumavkami vytvoří největší sraženina. Díky tomu a odečtení precipitátu antigenního proteinu od celkové hodnoty proteinů je možné získat přesnou hodnotu protilátek obsažených v objemu konkrétního studovaného séra. Dále se množství proteinových molekul sraženiny určuje množstvím dusíku nebo pomocí kolorimetrických metod.
Hodnocení hodnot
Odhad hodnot precipitace v diagnostické metodice by měl brát v úvahu možnost přítomnosti protilátky, která nemá vlastnost precipitinu, v imunitním séru, z čehož vyplývá, že samotná sraženina nemusí být vzniká po reakci s antigeny. Seznam takových molekul zahrnuje neúplné protilátky a některé druhy ze skupiny gama-A globulinů.
Srážecí reakce v laboratorních podmínkách nachází uplatnění v různých typech modifikací. Například termoprecipitační reakce se používá k detekci bakteriálních antigenů botulismu, antraxu atd., které nepodléhají tepelné denaturaci. Na rozdíl od kruhové precipitace se u tohoto typu reakce používají filtráty daného materiálu ve vařeném stavu.
Analýza srážecí reakce v komplexní směsi neumožňuje charakterizovat vlastnosti jednotlivých prvků směsi. V takových případech se člověk uchýlí k metodě srážení v agaru a také k použití imunoelektroferézy.
Difúzní srážky
V této oblasti výzkumu existuje koncept difuzní srážecí reakce (RPD). Je založena na schopnosti difundovat v gelu protilátky a rozpustné antigeny. Difúze je schopnost molekuly určité látky proniknout do molekul jiné látky, což je způsobeno tepelným pohybem.
Gel je systém rozptýleného typu, ve kterém je kapalná fáze distribuována rovnoměrně v pevné fázi. Nejčastěji se pro takovou reakci používá agarový gel.
Po uvedení parametrů se vpodmínek, za kterých mohou molekuly vůči sobě difundovat, bude jejich setkání doprovázeno tvorbou komplexu antigen + protilátka. Takový novotvar je schopen difundovat, je v samotném gelu, a vysráží se ve formě proužku, který lze detekovat pouhým okem. Pokud jsou antigen a protilátka homologní, žádný pás se nevytvoří.
Vytvoření podmínek, za kterých bude probíhat difúze v agarové vrstvě, zahrnuje nalití složek, ale celkový počet jamek a jejich relativní poloha je určena rozhoduje typ úkolu, který je požadován. RPD dává člověku schopnost detekovat a identifikovat neznámé izolované viry testováním pomocí známých protilátkových sér.
Aplikace
Srážky jsou široce používány nejen v diagnostice nemocí, ale nacházejí své uplatnění také při soudním lékařství. Je těžké si představit analýzu, ve které je možné určit druh krve, části orgánu nebo tkáně nalezené na zločinecké zbrani, která nevyužívá srážecí reakci. Při tomto procesu se používají precipitační séra, která se získávají imunizací různých zvířat a ptáků. Je důležité, aby hladina sérového titru nebyla nižší než 1:10 000 a také musí mít dostatečnou specificitu. Ze zjištěné skvrny krve nebo její kůry se udělá extrakt pro fyzikální. řešení, které bude dále vystavenovysrážené sérum. Podle této reakce je možné stanovit typy tkáňových a orgánových proteinů lidí i zvířat. Získávání zakalených extraktů nutí člověka uchýlit se ke srážení na agaru.
Závěry
Analýzou přečtených informací můžeme dojít k závěru, že srážecí reakce jsou pro člověka extrémně důležité, protože umožňují diagnostikovat různé antigeny pomocí protilátek, tento jev je také široce používán při soudním lékařském vyšetření a umožňuje identifikovat typ krev, tkáň nebo orgán podle vztahu k určitému subjektu. Existuje několik typů a metod srážení, které se používají v souladu s nově vznikajícími potřebami řešeného problému.
