Pojem „mikroskopie“má řecké kořeny. V překladu to znamená studium objektů pomocí vysoce přesných přístrojů. V poslední době jsou stále populárnější fluorescence a elektronová mikroskopie.
Rozlišení
Zpravidla se tím rozumí minimální vzdálenost, ve které mohou být umístěny jasně rozlišitelné předměty. Míra průniku do mikroskopického světa, schopnost uvažovat o velikosti zkoumaného prvku bude záviset na rozlišení zařízení. Při velkém zvětšení mohou hranice objektů splývat. V souladu s tím existují určité meze, za kterými je aproximace prvků bezvýznamná.
Metoda luminiscenční mikroskopie: mechanismus
Když se energie absorbovaná látkou přemění na viditelné záření, vznikne záře. Říká se tomu luminiscence. Tento jev je způsoben tím, že některé látky pod vlivem světla začnou vyzařovat paprsky s jinou (většinou velkou) vlnovou délkou. Navíc některé předměty, které při běžném osvětlení mají jistoubarvu, pod vlivem ultrafialového záření změní jejich barvu.
Specific
Předmět, který není vidět pod ultrafialovým světlem, může vyzařovat jasný lesk, pokud je ošetřen speciální látkou. V něm živly ve tmě svítí různými barvami. Síla záření je různá, ale zpravidla je malá. V tomto ohledu je fluorescenční mikroskopie účinná v zatemněné místnosti. Při použití tohoto typu studie je objekt pozorován ve světle, které sám vyzařuje. Chemické složení tkání, buněk ovlivní kvalitu studie. Fluorescenční mikroskopie je do určité míry považována za histochemickou studii.
Klasifikace
Fluorescenční mikroskopie může být primární nebo sekundární. V druhém případě je předmět zpracován speciálními sloučeninami, které dodávají záři. Primární fluorescenční mikroskopie je založena na vlastní schopnosti prvku emitovat světlo.
Zařízení
Fluorescenční mikroskopie se provádí pomocí různých zařízení. Jejich hlavním prvkem je iluminátor. Je vybaven UV lampou. Zařízení navíc využívají sadu filtrů. V některých zařízeních existuje poměrně mnoho různých konfigurací. Podle toho, jaká barva je použita k vybuzení luminiscence – ultrafialová nebo modrá, je mezi zdroj světla a studovaný objekt umístěn vhodný filtr. Protože záře mikroskopického prvku je energeticky slabší než vzrušující světlo, bude zachycena pouze za jedné podmínky. Přebytečné paprsky ze zdroje musí být odříznuty žlutozeleným filtrem. Nachází se na okuláru přístroje. Nejvýraznější efekt luminiscence bude, když filtr úplně odřízne paprsky vycházející ze zdroje světla.
Z čeho se skládá instalace viditelného světla? Obsahuje zdroj jasného světla a biologický mikroskop. Mezi zrcadlem přístroje a lampou je umístěn modrofialový filtr. Může to být FS-1, UFS-3 a tak dále. Žlutý filtr se nasazuje na okulár mikroskopu. S jejich pomocí dopadá na předmět modrofialové světlo. Vyvolává luminiscenci. Ale toto světlo může rušit vidění záře. Proto je na cestě k oku odříznut žlutým filtrem. Osvětlení je nastaveno podle Koehlerovy metody s jednou výjimkou. Membrána kondenzátoru musí být zcela otevřena. Při zkoumání je důležité použít nefluorescenční imerzní olej. Pro snížení vlastní záře se do ní přidává nitrobenzen (2-10 kapek / 1 g).
Luminiscenční mikroskopie: aplikace v mikrobiologii
Výhody tohoto typu studia jsou:
- Schopnost barevného zobrazování.
- Vysoce kontrastní samovyzařující prvky na černém pozadí.
- Detekce a lokalizace určitých typů virů a mikrobů.
- Schopnost studovat transparentní a neprůhlednéživé organismy.
- Studium životních procesů v jejich dynamice.
Je třeba také říci, že luminiscenční mikroskopie přispívá k rozvoji nejlepších metod histo- a cytochemie, expresní diagnostiky.
