Selenitový bujón je obohacovací médium se selektivními vlastnostmi, určené k izolaci patogenních bakterií rodu Salmonella (lat. Salmonella). Je velmi účinné, pokud je nutné tento konkrétní patogen detekovat mezi ostatními zástupci střevní mikroflóry. Médium se používá jak pro klinickou diagnostiku, tak pro hygienické účely při testování potravin.
Obecné vlastnosti
Selenitový bujón se připravuje na bázi prášku, který je homogenizovanou směsí různých složek kompozice. Barva suchého materiálu může být světle žlutá nebo krémová v závislosti na typu média. Prášek má volně tekoucí vlastnosti.
Hotový seleničitanový vývar je tekuté průhledné médium světle žluté barvy. Tato hmota se nalije do nádob, kde se provádí výsev pro další inkubaci.
Existují tři hlavní typy seleničitanového vývaru:
- čisté médium - vhodné pro izolaci salmonely z klinického i sanitárního materiálu;
- s přídavkem mannitolu (dvousložkový bujón) – určeno pouze pro práci s klinickým materiálem;
- cystein-seleničitanové médium – lze použít k izolaci salmonel z biomateriálu patologického pacienta (výkaly, moč atd.).
Tyto typy se mírně liší složením a akčními vlastnostmi.
Hlavním úkolem seleničitanového bujónu je podporovat hromadění salmonel a inhibovat růst doprovodné mikroflóry. To umožňuje nejen detekovat patogen v materiálu, ale také jej následně přenést na agar. Médium bylo vyvinuto Leiflerem, který jako první objevil selektivní účinek seleničitanu proti Salmonelle.
Složení
Selenitový vývar obsahuje:
- hydrolyzát kaseinu;
- laktóza;
- fosforečnan sodný;
- hydroselenitan sodný.
Selenit-cysteinové médium kromě těchto složek obsahuje L-cystein a hydrogenfosforečnan sodný. Složení mannitolového bujónu se liší tím, že místo kaseinového hydrolyzátu obsahuje peptický štěp živočišné tkáně. V takovém prostředí není laktóza, ale je tam mannitol. Ten působí jako fermentovatelný substrát a poskytuje pufrační vlastnosti bujónu.
Všechny složky prášku, kromě hydroseleničitanu sodného, se podmíněně nazývají část A a selektivní látka se nazývá část B.
Princip fungování a vlastnosti prostředí
Vývar ze seleničitanu funguje jako paměťové médiumse selektivním působením. Selektivní účinek je zajištěn toxicitou seleničitanu, který inhibuje růst většiny mikroorganismů. Bakterie rodu Salmonella jsou zároveň schopny tuto sloučeninu obnovit, čímž eliminují toxický účinek na vlastní buňky. V důsledku reakce však vzniká alkálie, která snižuje škodlivý účinek seleničitanu na růst přidružené mikroflóry, a proto je nutné pH stabilizovat. Tuto funkci plní bakterie, které fermentují laktózu za vzniku kyseliny. Pufrování média zajišťuje fosfát.
Ve dvousložkovém bujónu je pH stabilizováno mannitolem. Cysteinové médium zlepšuje selektivní účinek proti salmonele. Takový bujón je účinný pro kontrolu infekčního pozadí u pacientů v neakutním stádiu onemocnění nebo u rekonvalescentů.
Projev růstových charakteristik referenčních kmenů v médiu lze pozorovat po 12-24 hodinách od začátku inkubace. V tomto případě tvoří Salmonella bezbarvé kolonie.
Funkce vaření
Příprava média probíhá ve dvou fázích. Nejprve se připraví roztok se selektivní složkou v množství 4 gramy seleničitanu sodného na litr destilované vody. Poté přidejte 19 gramů hlavního prášku (část A). Roztok se důkladně promíchá a zahřívá, dokud se částice zcela nerozpustí, a poté se nalije do sterilních zkumavek.
Při vaření je důležité se říditteplotní režim, protože médium je nestabilní vůči přehřátí. Sterilizaci vývaru lze provádět pouze ve vodní lázni nebo použít proud páry. Autoklávování média je přísně zakázáno.
